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但在穆利斯那个时代,PCR仪还没有发明出来,所以他的PCR实验需要纯手工操作:分别将3个水浴槽设置为高温变性温度、退火温度、延伸温度,然后把装着PCR管的小篮子放进高温变性水浴槽里泡着,十几秒钟后,DNA充分变性了,便把篮子放退火水浴槽里几秒钟,让引物和DNA结合,再把篮子放延伸水浴槽里几十秒合成新的DNA。一个PCR循环,就要把篮子在3个水浴槽都过上一轮。几十个循环下来,技术员已是筋疲力尽。
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为了减少“生物民工”的劳动量,西特斯公司在1988年发明了第一台PCR自动化热循环仪,实现了PCR技术的自动化。有了耐高温DNA聚合酶和PCR仪这两大法宝,PCR技术终于可以投入应用。1989年,《科学》杂志隆重报道了PCR技术和耐高温DNA聚合酶,西特斯公司也和罗氏(Roche)公司合作,将PCR技术用于临床诊断。1991年,罗氏公司斥资3亿美元,买下了西特斯公司的PCR技术专利。
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然而,穆利斯却没有从这笔巨款中分到一杯羹。1985年,在PCR技术初见成果的时候,西特斯公司见穆利斯迟迟没有动笔把该技术写成论文投稿,便催他手下的技术员先写了论文,投给《科学》杂志。等穆利斯终于写好论文时,投稿却到处碰壁,最后,在华人生物学家吴瑞的推荐下,穆利斯的论文发表在《酶学方法》(Methods in Enzymology)杂志上。穆利斯不满被公司其他人抢了功劳,参加完沃森的“人类分子生物学”会议后不久就辞职离开,日后PCR技术专利转让带来的巨额利润也与他无缘。
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好在世人并没有忘记他,不仅多家生物公司向他抛来橄榄枝,日本天皇夫妇还亲自为他授予巨奖。1993年的一个清晨,诺贝尔奖基金会给他打来电话,通知他获得了诺贝尔化学奖。获奖后,穆利斯出版了自传《心灵裸舞》,总算圆了自己的作家梦,并在写书期间迎娶了他的第四任妻子,成了事业爱情双丰收的人生赢家。尽情享受过人生后,74岁的穆利斯在2019年8月7日因肺炎去世。
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虽然穆利斯一生放浪形骸,但他发明的PCR技术确实极大地推动了生物学的进步。成大事者不拘小节,也许正是穆利斯洒脱不羁的性格造就了他天马行空的想象力和果断的行动力,才让当时不被多数人看好的PCR技术得以问世。
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参考文献
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1.(美)凯利·穆利斯.心灵裸舞[M].上海科技出版社,2006.
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2.Chien A., Edgar D.B., Trela J.M..Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus[J].J Bacteriol.1976 Sep, 127 (3): 1550-7.
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3.Guyer R.L., Koshland D.E.Jr.The Molecule of the Year[J].Science.1989 Dec 22, 246 (4937): 1543-6.
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生命密码2:人人都关心的基因科普 干细胞研究造假大事记
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生命功能的基本载体是细胞。
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生命就是从受精卵,即一个干细胞开始的。从一个干细胞发育成含有几十万亿个细胞的成人,人类至今也没弄清楚这其中到底是如何变化的,但至少全人类达成了共识:干细胞太有用了!
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2018年11月23日,国务院印发《关于支持自由贸易试验区深化改革创新若干措施的通知》,明确提出自贸试验区内医疗机构可根据自身的技术能力,按照有关规定开展干细胞临床前沿医疗技术研究项目。
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不光中国,纵观全球,不少国家都在大力扶持干细胞研究,争相投入大量人力物力。在医学研究领域,干细胞绝对是大热门,甚至是……造假大热门。
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干细胞行业已成大蛋糕
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早在1956年,美国医生爱德华·托马斯(Edward Thomas)就发现可以通过骨髓移植来治疗白血病,并凭此获得1990年的诺贝尔生理学或医学奖。不过,当时世人并不知道是骨髓中的哪些物质起了治疗作用。
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直到1963年,加拿大科学家恩尼斯特·莫科洛克(Ernest McCulloch)和詹姆士·堤尔(James Till)在血液中发现了造血干细胞。人们这才发现,原来人体中存在这么一种神奇的细胞,它可以持续分裂增殖,还能分化为各种功能的细胞。至此,科研人员开始了对干细胞的广泛研究。
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人体中的干细胞可以分为三种。一种是全能干细胞,也就是受精卵或者早期的胚胎干细胞,可以分化成任何类型的细胞;一种是多能干细胞,比如骨髓、胎盘、脂肪中的间充质干细胞;还有一种就是像造血干细胞那样的单能干细胞,只能分化为特定种类的细胞。
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这些干细胞经过人工诱导,可以分化为所需的细胞类型,用于修复人体受损的组织和器官。然而,人体中的干细胞数量有限,而且人类胚胎干细胞的获取又牵涉诸多伦理道德问题,所以干细胞的研究和临床应用受到很大限制。
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时间到了2006年,日本科学家山中伸弥有了新的发现。他把几个基因导入成纤维细胞中,让已分化的体细胞发生了重编程,恢复到类似胚胎干细胞的状态。如此一来,科学家们便可以把普通体细胞转化为干细胞,使干细胞研究不再受原材料不足的限制。这种“人造”干细胞被命名为诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS干细胞)。山中伸弥也因此获得2012年诺贝尔生理学或医学奖。
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尽管后来又有多位科学家对诱导性多能干细胞的诱导技术进行了改良,但目前诱导性多能干细胞的诱导仍然存在诱导效率低下、成本高昂、工序复杂且生产周期冗长的问题。想要培养出能满足临床需要的海量干细胞,仍需时日。
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但诱导性多能干细胞的出现还是让科学家们看到了希望,给投身干细胞研究领域的有志者们以极大的鼓舞。干细胞的临床研究正进行得如火如荼,用干细胞培养的视网膜、人造心脏、人造肾脏等器官和组织也相继问世。
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干细胞几乎能分化为我们需要的任何细胞,简直像神话中的“活死人、肉白骨”的灵丹妙药,各国政府拨给干细胞研究的经费不计其数。遗憾的是,面对巨大的名利诱惑,少数研究者终究没能守住底线,在这股干细胞热潮里弄虚作假、从中渔利。
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