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1701462132 ⑶头部固定器的小框与主框应平行;
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1701462134 ⑷各衔接部、螺丝、滑尺须拧紧;
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1701462136 ⑸主框两臂应平行,如不平行,应用水平仪进行调整。另外,两耳杆的尖端接触点应在正中线。
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1701462138 (2)以大鼠为例的应用。由于大鼠的头形变异较小,用于定位实验较准确。常用的大鼠虽种系不太纯,但体重150~350g之间者均可选用。在同一组实验中最好选体重相近的,这样鼠脑的大小相差也不致太大。
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1701462140 固定鼠头虽以两外耳道中心点连线及上门齿根部为准,但在规定水平标准面时,各个图谱有所不同,在此以de Groot图谱做一说明:该图谱规定要求耳杆中心应低于上门齿根部(即仪器的门齿槽上缘)5mm。具体操作如下:
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1701462142 ⑴插入耳杆:将耳杆插入麻醉大鼠两外耳道内(注意外耳道方向),并使两耳杆上的刻度相同,旋紧螺丝固定,让鼠头不会松动。
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1701462144 ⑵调节门齿板:放松上颌固定器上的螺丝及门齿板下部旋钮,将门齿板与耳杆对齐,按所用图谱要求调整门齿板与耳杆中心连线的高度距离,之后旋紧固定螺丝,不得变动,以保证鼠头部的固定角度符合图谱要求。在大鼠的耳部固定好后,将鼠的上门齿套入门齿板中固定,再将眼眶括压在眼眶下缘,将动物从两侧方夹紧,然后旋紧固定。至此大鼠头部的固定基本完成。
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1701462146 ⑶确定三个标准平面及电极方向:沿矢状线切开头皮,暴露前囟中心及人字缝的尖部。首先装上电极移动架(在框架的12.5cm处),并装上假电极,测定耳杆尖中心的高度,然后将电极移到门齿槽的上缘,上下调整上颌固定器,使门齿槽的上缘比耳杆尖高5mm。这时通过门齿槽上缘与耳杆尖连线所作的与定位仪主框平行的平面即为水平零平面(H0);与所垂直通过头骨矢状缝的平面为矢状零平面(L0);通过两外耳道连线与上述两平面垂直的平面为冠状零平面(A0)(图2-2)。
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1701462151 图2-2 鼠头位置的标准平面
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1701462153 CA:前联合;CP:后联合;C:外耳道连线;B:上门齿槽(上颌固定器断面);
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1701462155 AA:矢状零平面;OO:水平零平面
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1701462157 为使确定三个平面的方法简化,可采用电极导向器(electrode guide,图2-3)。现将方法介绍如下:测量前囟中心到人字缝尖的直线距离后,移动活动针B,使与固定针A之间的距离等于前囟中心到人字缝尖的距离。若为兔或大鼠,将使B的尖端比A的尖端长1.5mm或1mm。A接触前囟中心,B接触人字缝尖。转动电极角度,使电极移动架上电极夹的有机玻璃块下缘平行于电极导向器上缘,固定的电极应与导向器上的指示直线(L)平行。去掉导向器,移动电极,使其尖端分别与前囟中心和人字缝尖接触,并测定在这两点时的H读数,按实验要求调节准确。
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1701462162 图2-3 电极导向器
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1701462164 A:前端金属针(固定针);B:后端金属针(活动针);
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1701462166 L:指示直线;H:有机玻璃;FS:固定螺丝
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1701462168 ⑷脑深部结构定位确定:按照大鼠立体定位图谱,调整前后、左右、上下的坐标,最后确定电极位置,为插入电极做准备。为证实位置的正确性,可采用普鲁士蓝标志法或连续切片技术。
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1701462170 ●普鲁士蓝标志法:实验完毕,用1.5V电压,电流1~4mA左右通电20~30s即可。然后结扎两侧颈总动脉,剪断双侧颈外静脉放血,再自颈总动脉向中枢端注射生理盐水直至将血液冲洗净,接着注射含1%亚铁氰化钾的10%福尔马林液。取出动物脑浸于10%福尔马林5~7天,而后做切片检查。在电极尖端可见小蓝点。反应式为:
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1701462172 4FeCl3+3K4Fe(CN)6→Fe4[Fe(CN)6]3+12KCl
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1701462174 其原理是通直流电时,电极阳极处不锈钢中高铁离子解离沉积下来,与组织内Cl-形成FeCl3,遇到亚铁氰化钾时,则产生普鲁士蓝。
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1701462176 ●连续切片法:在电极头附近,以50μm厚度作连续切片,找出尖端确实部位。
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1701462178 (二)迷宫系列
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1701462180 20世纪初,迷宫已经成为心理学家测试动物能力时常用的实验仪器。从那时起,研究者发明了各种迷宫并用其进行动物学习、记忆、空间认知、觅食策略等方面的研究。因迷宫任务具有明显的空间特征,所以迷宫研究结果为理解动物空间信息加工提供了丰富的数据和资料,因此研究者把迷宫更多地应用在对动物学习记忆过程特别是动物空间能力的研究中(王彦、苏彦捷,2001)。
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