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(4)浸脑厚片:浸入染液Ⅰ5min。注意:⑴此液必须浸没脑片,高出脑片3~5cm;⑵用竹夹(或玻璃棒,禁用金属镊子)将脑切片放入温度加热至60~65℃的染液中,并不断翻动,直至切片呈青白色;⑶温度不得高于70℃,否则颜色过深;⑷按染液Ⅰ配方配制溶液一份,可染人大脑厚片6~7片。
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(5)5min后取出,即放入大量冰水中浸洗2min。
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(6)浸入染液Ⅱ1~3min,直到灰质部分明显可见时取出,时间约为2min。
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(7)流水冲洗1min,时间不可过长,超过1min后脑片上的鲜蓝色将变成灰蓝色。
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(8)浸入显色液1~3min,此时灰质呈蓝色,白质颜色不变。
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(9)流水冲洗5~10min,时间过长脑片将会褪色。
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(10)结果:白质无色,灰质深蓝,界限分明;若脑组织新鲜,灰质着色后可显示微小核团,比未灌注固定液的脑厚片显色效果更好。
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(11)保存方法:⑴存放于含有2%盐酸的10%福尔马林液中,使脑厚片保存鲜艳的深蓝色。⑵用毛笔将热的10%~15%明胶水溶液涂于脑厚片的一面,然后贴在玻片上,轻压排出气泡,待明胶冷却后,存放于10%的福尔马林液中。此法较方法⑴效果更好。
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(周茵)
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现代生理心理学实验教程 实验4 脑组织切片的制作(一)
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——脑组织的固定
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【实验目的】
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(1)学习神经组织固定的基本原理。
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(2)初步掌握组织固定的基本技术。
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【理论基础】
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用固定剂将所需神经组织固定,是神经解剖学技术中常用的方法。经过固定的神经组织能较好地维持组织结构,尽量保持生前状态,使细胞的蛋白质、脂肪、糖等成分转变为不溶性物质,以保持原有状态。通过固定可使组织硬化,保持组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。
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因为甲醛水溶液渗透力强,固定均匀,对组织收缩较小,所以神经组织的固定多选用pH6~8醛类固定液。
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【实验对象】
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大鼠一只,雌雄不限,体重250g左右。
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【实验用品】
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实验手术器械1套,输液瓶2只,止水夹2只,100mL量筒1只,1mL注射器1只。
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0.9%生理盐水(冲洗液),10%福尔马林液(固定液),含30%蔗糖的10%福尔马林液,10%水合氯醛。
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