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1701463176 (8)浸入显色液1~3min,此时灰质呈蓝色,白质颜色不变。
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1701463178 (9)流水冲洗5~10min,时间过长脑片将会褪色。
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1701463180 (10)结果:白质无色,灰质深蓝,界限分明;若脑组织新鲜,灰质着色后可显示微小核团,比未灌注固定液的脑厚片显色效果更好。
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1701463182 (11)保存方法:⑴存放于含有2%盐酸的10%福尔马林液中,使脑厚片保存鲜艳的深蓝色。⑵用毛笔将热的10%~15%明胶水溶液涂于脑厚片的一面,然后贴在玻片上,轻压排出气泡,待明胶冷却后,存放于10%的福尔马林液中。此法较方法⑴效果更好。
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1701463184 (周茵)
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1701463192 现代生理心理学实验教程 实验4 脑组织切片的制作(一)
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1701463194 ——脑组织的固定
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1701463196 【实验目的】
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1701463198 (1)学习神经组织固定的基本原理。
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1701463200 (2)初步掌握组织固定的基本技术。
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1701463202 【理论基础】
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1701463204 用固定剂将所需神经组织固定,是神经解剖学技术中常用的方法。经过固定的神经组织能较好地维持组织结构,尽量保持生前状态,使细胞的蛋白质、脂肪、糖等成分转变为不溶性物质,以保持原有状态。通过固定可使组织硬化,保持组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。
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1701463206 因为甲醛水溶液渗透力强,固定均匀,对组织收缩较小,所以神经组织的固定多选用pH6~8醛类固定液。
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1701463208 【实验对象】
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1701463210 大鼠一只,雌雄不限,体重250g左右。
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1701463212 【实验用品】
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1701463214 实验手术器械1套,输液瓶2只,止水夹2只,100mL量筒1只,1mL注射器1只。
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1701463216 0.9%生理盐水(冲洗液),10%福尔马林液(固定液),含30%蔗糖的10%福尔马林液,10%水合氯醛。
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1701463218 【实验内容】
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1701463220 (1)将冲洗液、固定液分别装入输液瓶中,并排除输液管中气泡(先排固定液,再排冲洗液)。
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1701463222 (2)用10%水合氯醛麻醉动物,待动物麻醉后将其固定在方盘中。
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1701463224 (3)手术:⑴用直剪在大鼠剑突处横向剪开,并沿肋骨两侧向上打开胸腔;用止血钳将胸腔壁与动物嘴相夹固定。⑵迅速纵向打开心包膜,使心脏充分暴露;然后剪开左心室将冲洗液输液针头插入心脏主动脉(弓)中,并固定好针头。
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