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(1)切片机降温同时,将冲洗好的组织块伴以少许组织冷冻包埋液或调成糊状的羧甲基纤维钠放置在标本台上,置于机箱内冷冻,约15min即可。
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(2)将冻好的组织块标本台置于标本夹具上,切片刀装入刀架中,分别调整好标本夹具、刀架的角度(标本夹具、刀架的角度应由专业技术人员调整,一般只调一次,以后保证不动),拧紧固定螺丝。
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(3)用“↑”“↓”键调节标本夹具与刀架的距离,先按“>>”键,再按“↑”“↓”键,使组织块与切片刀处在将要切到的位置。
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(4)按制片要求调整切片厚度旋钮,本实验脑组织切片一般选取25~50μm。
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(5)放下防卷板,开启转轮的锁,即可切片。
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附注2 影响切片质量的几个问题
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1.切片刀的角度
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切片刀的角度指的是切片刀与组织块的夹角。角度过小,刀刃接触不到组织块;角度过大,刀刃刮组织块表面,切片容易碎,所以一般角度在10°为好。
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2.组织标本的冷冻温度
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冰冻切片要在组织块冷冻适度时迅速连续切下。组织块冰冻过硬,切片易卷易碎;组织块冰冻过软,切片易厚薄不均或成糊状。因此,在切片过程中要注意切片的外观形态,及时调整温度,以保证切片质量。调整温度的方法有两种:⑴用“↑”“↓”键调节切片机的设定温度;⑵凭经验用手直接与组织标本接触,使其硬度略有变化,此方法快,但初学者不易掌握。
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3.“冰晶”问题
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组织块中的水分在冰冻过程中可形成冰晶,如冰晶过多过大,在显微镜下可见许多如冻豆腐状的小空隙,严重影响切片的质量和观察。为防止冰晶的出现,常用的办法是在冷冻前将组织在含30%蔗糖的福尔马林液中浸透。蔗糖福尔马林液的比重较大,组织块放入后浮在液面上,待蔗糖福尔马林液逐步浸入,组织块下沉后,即可进行切片。用10%~30%的蔗糖福尔马林液均可不同程度地防止冰晶的产生,做出好的切片。另一种方法是:可将切片在裱片之前置于70%的酒精溶液中浸泡,使切片缩水,以防止冰晶出现。
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附注3 切片制作过程中的注意事项
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(1)爱护机器的每一个部件,轻拿轻放。
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(2)机箱内的温度传感器是恒冷箱切片机的核心部件,没有特殊问题请勿拆卸挪动。
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(3)上刀时,刀片不要碰到其他物体,以免损坏刀刃。
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(4)正确使用护刀板,以免将组织标本或手碰伤。
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(5)有水的毛笔不可在冷冻箱内使用,以免与标本块冻结在一起。
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(6)切片过程中,不要长时间打开箱盖,以免影响制冷效果。
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(7)裱片时,要稳、准,不要着急,尽量使切片放正,少出气泡。
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(8)在每次裱片前和切片机用完后,务必将转轮锁好(将转轮缺口对准黑点)。
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(9)关闭电源须在制冷停止时进行。
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(10)切片完成后,务必清理冷冻箱内的标本残留物,擦干水迹并使之干燥,以防止机器锈蚀损坏。
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(周茵)
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