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随着性周期时间的推移,周期性排卵动物表现出生殖器和附属生殖器官的形态学和功能学变化。通过阴道涂片法,可观察性周期阴道上皮细胞的形态学变化,进而了解在性周期各个时期中卵巢的活动与性激素的变动。
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低等哺乳动物性行为主要受性激素(包括雌激素和雄激素)的调控,切除分泌这些激素的内分泌腺后,实验动物不再表现出性行为。因此,性腺的切除可作为研究性行为的一种方法。
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【实验对象】
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相同品系成年大白鼠4只:3只雌性、1只雄性。
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【实验用品】
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常用手术器械一套,注射器(2mL、5mL各1只),显微镜,小烧杯,载玻片,棉签,鼠板。
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碘酒,70%酒精,消炎粉,卡那霉素注射液,0.9%生理盐水,2mg/mL雌二醇(乙烯雌酚),20mg/mL黄体酮,10%水合氯醛,瑞特氏染料。
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【实验内容】
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1.动物分组
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将雌性大鼠三只分成三组:第一组为对照组,第二组为去卵巢组,第三组为去卵巢且注射雌二醇组。各组大鼠分笼饲养,做好标牌。
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2.检查正常雌性大鼠的性周期
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(1)将棉签用生理盐水浸湿,左手抓住大鼠并拉住鼠尾巴,右手持棉签从阴道插入,旋转两周后取出棉签在载玻片上涂片,干后放在光学显微镜下检查。如果用瑞特氏染料染色3~5min,则细胞核被染色,细胞的形态更易辨认。
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(2)光学显微镜下观察,对照图6-1确定大鼠的性周期。
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3.切除卵巢
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(1)取第二、第三组雌性大鼠分别称重,按下列程序进行手术。
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(2)按350~400mg/kg体重腹腔注射10%水合氯醛麻醉动物。
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(3)大鼠麻醉后按腹位固定在鼠板上,剪去腹部被毛并对剪毛部位用碘酒与70%酒精进行常规消毒。
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(4)在大鼠腹部下2/3处做一纵向切口(约3cm),开腹。
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(5)用镊子找出靠近背部的两侧卵巢,分离脂肪组织,结扎两侧输卵管后,切下大鼠卵巢(图6-2)。
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(6)器官组织复位后,腹腔滴注少量卡那霉素注射液。
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(7)关腹分层缝合:肌肉连续缝合,皮肤间断缝合。
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(8)用生理盐水擦拭皮肤血迹,切口部位撒消炎粉。
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(9)第一组大鼠不摘除卵巢,只行切开与缝合腹壁和皮肤的手术。
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图6-2 大鼠卵巢
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