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【实验用品】
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立体定位仪,常用手术器械,台秤,开颅钻,纱布,脱脂棉,电刺激器,双极电极。
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70%酒精,碘酒,3%戌巴比妥钠溶液,0.9%生理盐水,骨蜡,双氧水。
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【实验内容】
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1.仪器校验
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用透明三角板检查电极支持架的三个滑尺是否相互成直角。上下移动滑尺,是否与电极移动架的支柱平行。头架的小框是否与主框平行等。
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2.确定零点
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参看“脑的立体定位技术”一节将两侧耳杆固定柱置12cm处(由后侧读),将一侧耳杆固定柱下面的螺丝旋紧。将两侧耳杆装在固定柱上,使其尖端在仪器中间部位彼此接触(两耳杆的读数相同)。取下一侧耳杆,另一侧固定于原处。把电极移动架装在紧靠耳杆固定柱处。将上下移动滑尺旋到最高的位置,装上电极,使电极的游离部分约35cm,而后将电极固定。移动电极移动架,使电极尖恰在耳杆尖的中心点与耳杆接触,记下前后移动滑尺上的读数(AP)及上下移动滑尺上的读数(H-10),并记下左右移动滑尺的读数减去电极半径的数值(即为L0)。中心点,与耳杆接触点就是仪器零点。H-10之上10mm为生理实验零点。旋松上颌固定柱上的螺旋,将上颌固定器向后推,直到眼眶括的钩部距耳杆尖约2cm处,然后固定。转动电极移动架上的前后方向的滑尺,使电极尖恰在两眼眶之间,左右移动上颌固定器校对中线,使两侧眼眶括完全对称,然后调节上颌固定器的高度,使眼眶括钩部的中点下缘与电极尖完全在同一水平面上(即H10),然后将上颌固定器推回原位。旋松电极移动架下的螺旋,将电极移动架取下准备使用。
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3.麻醉动物
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本实验需要浅麻醉(刺激耳内毛有反应)。可以采用3%戌巴比妥钠35mg/kg体重腹腔注射麻醉。
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4.固定猫头
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取下电极移动架,用镊子扩张外耳道,将耳杆沿镊子插入外耳道内,将耳杆刻度向后从耳杆固定柱上方套入,左右两侧相同推动耳杆,使猫头牢固地固定,并使两侧耳杆上的刻度数相同,即可旋紧固定耳杆的螺旋而后将眼眶括的钩压在猫的眼眶下缘的最低点,加以固定。拉出猫舌头,装上牙齿固定杆,恰使钩在两大臼齿之间,用力上抬旋紧螺旋,猫头即可牢固地固定。
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5.暴露颅骨
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剪去头顶部被毛,用酒精与碘酒消毒手术部位,之后沿矢状缝做一个长6cm的皮肤切口,剥离皮下组织和肌肉,将骨膜推向两侧,向左右分离各2cm,暴露前囟、矢状缝和人字缝。在前囟中心和人字缝尖连线后1/3处,于矢状缝外侧0.5cm处,钻一小孔。用小骨钳向四周扩大。但要保留前囟中心和人字缝尖,切勿损伤脑组织。适时滴加生理盐水,保持手术部位湿润,出血时用纱布将血吸干并用骨蜡止血。
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6.定位坐标
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7.刺激参数
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刺激强度以刚能引起肌肉收缩为宜,可采用电刺激器(双向脉冲波)进行,频率90~100Hz。也可用方波刺激器,频率5~100Hz,波宽0.3~5ms,振幅2~10V,串长5~10s。
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电极一般用双极电极。电极直径70~90μm,极间距离0.3mm。刺激前要检查电极是否好用,必要时也可用单极电极,但单极电极刺激范围广,定位不准。
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【说明及建议】
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“怒叫中枢”在顶骨投影点,距前囟16~18mm,太大或太小,说明固定的高低水平有问题。当电极插入预定部位后,持续刺激10s,观察到猫怒叫、瞳孔放大、瞬膜收缩、竖毛、翘尾、张爪及脚底肉垫出汗等反应。也可将刺激电极上下、左右、前后移动,以确定猫怒叫中枢的局部位置。
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(苏彦捷)
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