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T淋巴细胞在体外培养过程中受到有丝分裂原和特异性抗原刺激时，可发生母细胞转化。刀豆蛋白A（Con A）使T淋巴细胞母细胞转化的机理可能是它与细胞膜上的受体结合，使腺苷酸环化酶活化后导致cAMP增多之故。由某种抗原致敏的T淋巴细胞，在体外如果再次遇到相同抗原时，发生母细胞转化，称为特异性转化。
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2．仪器和试剂
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常用手术器械一套，注射器，不锈钢网（200目），血球计数板，96孔培养板，微量移液器，吸管多支，玻璃纤维滤纸；离心机，β计数器（含闪烁液），CO2孵育箱，多头细胞收集器，烤箱。
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刀豆蛋白A（Con A，中国科学院上海生化研究所产）。LPS（美国Sigma公司生产），生理盐水，蒸馏水，1.8%NaC1溶液，2%乙酸。
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RPMI 1640培养液：称取RPMI1640粉10.4 g（美国Sigma公司生产），加重蒸馏水约500mL，混后加1mol/L HC1 2mL，待完全溶解后加入1mol/L NaOH 2 mL调pH至7.4～7.6，补加蒸馏水至1000mL。用6号玻璃器除菌分装，—20℃保存备用。
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完全培养液：临用前每80mL RPMI 1640培养液加20mL10%小牛血清（fetal bovine serum,FBS），再添加30g/L谷氨酰胺1mL，灭菌的60g/LNaHCO33mL，10000u/mL链霉素和10000u/mL青霉素各1mL。
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3．方法
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（1）将已经建立情绪应激模型的动物在最后一次电击实验后立即麻醉断头处死，开腹取全脾，将之剪成约5mm长的小段。
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（2）将脾放在不锈钢网上，分次加入4～6mL生理盐水，用一注射器芯挤压过滤网（注意：不得采用碾磨的动作），得单细胞悬液。
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（3）将2～3mL上述悬液倒入离心管，1000r/min离心5min，弃去上层清液。
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（4）在上述沉淀中加入3～4mL无菌蒸馏水或去离子水，振荡10～15s后，迅速加入等量的1.8%NaC1溶液，将液体调回等渗（此步骤的目的是破坏红细胞）。
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（5）1～2min后，待被破坏的红细胞残渣沉底后，将上层悬液移入另一离心管，1000r/min离心5min，倒去上层清液。
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（6）在上述沉淀中加入3mL完全培养液，振荡后得纯白细胞悬液。
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（7）将上述悬液吸出100μL，用2%乙酸稀释50～100倍后，显微镜下用血球计数板计算每毫升悬液中所含的白细胞数。
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（8）用完全培养液将白细胞悬液的浓度调至5.0×106个/mL备用。
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（9）在96孔板的试样孔和对照孔中均加入上述悬液100μL，然后再加入含有一定浓度有丝分裂原（如PHA，ConA，LPS等）的1640培养液100μL（对照组加入的1640培养液中不含有丝分裂原）。在本实验中，测量T淋巴细胞转化使用的有丝分裂原为ConA，根据前人的实验结果，可预先用含10%FBS的RPM11640培养液将其配制成2μg/mL和10μg/mL两种浓度，这样试样孔中ConA的最终浓度为1μg/mL（亚适浓度）和5μg/mL（最适浓度）。本实验测量B淋巴细胞转化使用的有丝分裂原为LPS，可预先将其配制成2μg/mL和10μg/mL两种浓度，这样试样孔中LPS的终浓度为1μg/mL（亚适浓度）和5μg/mL（最适浓度）。包括对照组在内的每一组都设3个复孔，计算结果时取三者cpm的平均值。
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（10）将培养板放在37℃，5%CO2的环境下培养43小时后取出，每孔加入含10μCi/mL[1]的3H-TdR1640溶液50μL，然后再培养5小时。
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（以上各步骤中，药品、容器、实验器械及实验环境均需无菌。）
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（11）用多头细胞收集器将培养完毕的淋巴细胞收集在玻璃纤维滤纸上，经反复冲洗后，把滤纸放入80℃烤箱中烤干。
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（12）将烤干的滤纸片放入装有5mL闪烁液的闪烁瓶中，通过液体闪烁计数仪（β计数器）记录每分钟的闪烁次数（cpm值）。该值即反映了淋巴细胞转化的程度。
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（二）血清IgG抗体水平测定
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1．原理
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标准酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），是以酶标抗原与抗体结合量的多少来进行检测的。如果有未知抗原，则酶标抗原和未知抗原竞争与抗体结合。把抗原的溶液与酶标记的抗原溶液，以不同比例混合，然后与载体表面温育，再通过用酶的特殊底物的水解量来确定未知溶液有无抗原及抗原量的多少。在未知溶液中抗原越多，则标记抗原附着的越少。酶底物水解的量，可以通过酶标仪精确地测定。
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2．仪器与试剂
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小牛血清白蛋白（FBS）（中国医学科学院血液研究所，天津市生化制品厂生产），福氏佐剂，辣根过氧化酶标记的羊抗大鼠IgG结合物（北京华美公司生产）。酶标仪（北京新技术应用研究所），ELISA标准反应板。
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