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（5）1～2min后，待被破坏的红细胞残渣沉底后，将上层悬液移入另一离心管，1000r/min离心5min，倒去上层清液。
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（6）在上述沉淀中加入3mL完全培养液，振荡后得纯白细胞悬液。
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（7）将上述悬液吸出100μL，用2%乙酸稀释50～100倍后，显微镜下用血球计数板计算每毫升悬液中所含的白细胞数。
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（8）用完全培养液将白细胞悬液的浓度调至5.0×106个/mL备用。
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（9）在96孔板的试样孔和对照孔中均加入上述悬液100μL，然后再加入含有一定浓度有丝分裂原（如PHA，ConA，LPS等）的1640培养液100μL（对照组加入的1640培养液中不含有丝分裂原）。在本实验中，测量T淋巴细胞转化使用的有丝分裂原为ConA，根据前人的实验结果，可预先用含10%FBS的RPM11640培养液将其配制成2μg/mL和10μg/mL两种浓度，这样试样孔中ConA的最终浓度为1μg/mL（亚适浓度）和5μg/mL（最适浓度）。本实验测量B淋巴细胞转化使用的有丝分裂原为LPS，可预先将其配制成2μg/mL和10μg/mL两种浓度，这样试样孔中LPS的终浓度为1μg/mL（亚适浓度）和5μg/mL（最适浓度）。包括对照组在内的每一组都设3个复孔，计算结果时取三者cpm的平均值。
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（10）将培养板放在37℃，5%CO2的环境下培养43小时后取出，每孔加入含10μCi/mL[1]的3H-TdR1640溶液50μL，然后再培养5小时。
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（以上各步骤中，药品、容器、实验器械及实验环境均需无菌。）
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（11）用多头细胞收集器将培养完毕的淋巴细胞收集在玻璃纤维滤纸上，经反复冲洗后，把滤纸放入80℃烤箱中烤干。
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（12）将烤干的滤纸片放入装有5mL闪烁液的闪烁瓶中，通过液体闪烁计数仪（β计数器）记录每分钟的闪烁次数（cpm值）。该值即反映了淋巴细胞转化的程度。
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（二）血清IgG抗体水平测定
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1．原理
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标准酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），是以酶标抗原与抗体结合量的多少来进行检测的。如果有未知抗原，则酶标抗原和未知抗原竞争与抗体结合。把抗原的溶液与酶标记的抗原溶液，以不同比例混合，然后与载体表面温育，再通过用酶的特殊底物的水解量来确定未知溶液有无抗原及抗原量的多少。在未知溶液中抗原越多，则标记抗原附着的越少。酶底物水解的量，可以通过酶标仪精确地测定。
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2．仪器与试剂
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小牛血清白蛋白（FBS）（中国医学科学院血液研究所，天津市生化制品厂生产），福氏佐剂，辣根过氧化酶标记的羊抗大鼠IgG结合物（北京华美公司生产）。酶标仪（北京新技术应用研究所），ELISA标准反应板。
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3．实验程序
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（2）取血：最后一天行为应激训练结束后，立即从大鼠眼眶取血，用1mL离心管收集血液，放置3小时后，离心1500r/min20min，取上清液，放入4℃冰箱备用。
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（3）血清IgG抗体水平测定
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⑴包被抗原：用FBS溶于pH9.6的碳酸盐缓冲液做为包被液，使用ELISA标准反应板（96孔），每孔加入100μL包被液（含FBS 2μg）。4℃冰箱过夜，结束后用T-PBS缓冲液洗三次并甩干（PBS0.05mol/L，pH7.4，每1000mL加入Tween-200.5mL）。
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⑵封闭：每孔加入200μL明胶（10mg/mL），4℃冰箱过夜，结束后用T-PBS洗3次。
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⑶加入一抗（待测血清）：将待测血清用PBS稀释成不同浓度梯度，每孔加入100μL，37℃1小时，结束后用T-PBS洗三次并甩干。
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⑷加入二抗：辣根过氧化酶标记的羊抗大鼠IgG结合物，原液用pH7.4 PBS1∶1000稀释，每孔加入100μL，37℃，培养1小时，结束后用T-PSA洗五遍。
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⑹终止反应：用2mol/L的H2SO4溶液，每孔50μL终止反应。
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⑺测定光吸收值：使用酶标仪，测定波长450nm的光吸收值，并自动打印出结果。从结果可以看出，应激鼠的IgG抗体的含量比对照组要低，即应激抑制抗体的产生。
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