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（2）取血：最后一天行为应激训练结束后，立即从大鼠眼眶取血，用1mL离心管收集血液，放置3小时后，离心1500r/min20min，取上清液，放入4℃冰箱备用。
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（3）血清IgG抗体水平测定
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⑴包被抗原：用FBS溶于pH9.6的碳酸盐缓冲液做为包被液，使用ELISA标准反应板（96孔），每孔加入100μL包被液（含FBS 2μg）。4℃冰箱过夜，结束后用T-PBS缓冲液洗三次并甩干（PBS0.05mol/L，pH7.4，每1000mL加入Tween-200.5mL）。
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⑵封闭：每孔加入200μL明胶（10mg/mL），4℃冰箱过夜，结束后用T-PBS洗3次。
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⑶加入一抗（待测血清）：将待测血清用PBS稀释成不同浓度梯度，每孔加入100μL，37℃1小时，结束后用T-PBS洗三次并甩干。
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⑷加入二抗：辣根过氧化酶标记的羊抗大鼠IgG结合物，原液用pH7.4 PBS1∶1000稀释，每孔加入100μL，37℃，培养1小时，结束后用T-PSA洗五遍。
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⑹终止反应：用2mol/L的H2SO4溶液，每孔50μL终止反应。
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⑺测定光吸收值：使用酶标仪，测定波长450nm的光吸收值，并自动打印出结果。从结果可以看出，应激鼠的IgG抗体的含量比对照组要低，即应激抑制抗体的产生。
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（三）血浆皮质酮的测定
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1．原理
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在一溶液系统中存在三种成分，即被测抗原（Ag）和放射性同位素标记抗原（Ag*），与有限量的抗体（Ab）进行竞争结合，形成带有标记的抗原-抗体复合物（Ag*-Ab），其反应如下：
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Ag＋Ag*＋Ab＝＝Ag*-Ab＋Ag-Ab
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（游离物F） 复合物（B）
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当标记物为一定量与抗体为有限量时，加入的被测物或标准物与标记抗原-抗体复合物之间呈现一种函数关系，即被测物或标准物的量越多，则标记物被稀释的程度越大，使标记抗体复合物的量减少。在测定中，放射性量也降低。
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2．试剂与仪器
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CH2Cl2（分析纯级，重蒸馏），闪烁液（按附件2方法配制），液体闪烁计数器（FT1907北京核仪器厂），3H皮质酮放免药盒（Sigma公司生产）。
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3．实验方法
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用Sigma公司生产的3H标记的皮质酮放免药盒。动物血浆0.1mL置于带磨口的试管内，用CH2C125mL反复振摇抽提5min。CH2C12层用双蒸水洗两次，取双份1mL抽提液放于两支试管内，在45～50℃水浴中蒸干；再按试剂盒说明操作；最后以10mL闪烁液，用液体闪烁计数器分析测定。从结果来看，应激后的小鼠血清皮质酮的含量比对照组要高。
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（肖健）
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现代生理心理学实验教程 第九章 高级心理过程的脑基础
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