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2.麻醉及术前准备
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按3.5mL/kg体重给大鼠腹腔注射10%水合氯醛。约3min动物麻醉后,将其固定于定位仪上。在动物头顶部备皮(面积约2~3cm2),待动物完全麻醉后(约15min)开始手术。
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3.损毁实验手术
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(1)用碘酒和75%酒精给听源性癫痫大鼠头顶手术部位消毒,然后用手术刀作一1.5~2.0cm的正中切口,以柳叶刀和干棉球将颅骨表面清理干净。
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(2)暴露头顶部颅骨表面矢状缝、冠状缝、前囟、后囟,用铅笔作标记。
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(4)下电极:将单极电极固定于电极移动架,按照坐标将电极尖端下至大鼠脑损毁部位。
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(5)电损毁:按阳极接电极座,阴极接皮肤的方式将恒流电源与大鼠相连,电流为1.0mA,时间为10s。
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(6)损毁完毕,在切口处撒少许消炎粉,将伤口缝合,每针间距约为3~5mm。至此电损毁实验的手术全部完成,将大鼠从定位仪上取下,放入饲养笼中,休息1周后进行下步实验。
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4.电刺激实验手术
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电刺激实验使用正常大鼠进行,手术的前三步与损毁实验(1)~(3)步骤相同,其后手术如下进行:
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(1)钻电极孔的同时,在与此孔相邻近的位置钻两个安装固定螺丝的孔,注意不要钻透;另外,用柳叶刀将颅骨表面打毛,为包埋电极做准备。
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(2)下电极:将双极电极与电极连接架相连并固定于电极移动架上,按照坐标将电极尖端下至大鼠中脑下丘部。
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(3)包埋:电极下好后,用干棉球将颅骨表面的渗出液擦干,将自凝牙托粉和牙托水调好后,慢慢地从电极的根部(颅骨表面)包埋起,直至与电极的插座齐为好。
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(4)待包埋的牙托粉干燥后,将电极移动架慢慢旋起,使电极连接架从电极插座中拔出(此步骤一定要注意,不要将电极一起拔出!),在伤口处撒少许消炎粉,包埋座的前后各缝一针。至此电刺激实验的手术全部完成,将大鼠从定位仪上取下,放入饲养笼中,休息一周后进行下一步实验。
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5.听源性癫痫大鼠的电损毁实验
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(1)损毁前:听源性癫痫大鼠用响度105~120dB、时间2min的铃声刺激,能观察到癫痫发作的行为模式:奔跑→间隔→奔跑→痉挛。
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(2)损毁后:手术1周后,用同样响度和时间的铃声刺激,听源性癫痫大鼠将没有癫痫发作的反应。
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(3)记录听源性癫痫大鼠在铃声刺激时的行为反应、潜伏期和持续时间。
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6.正常大鼠的电刺激实验
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(1)手术前:正常大鼠用响度105~120dB、时间2min的铃声刺激,没有癫痫发作反应。
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(2)电刺激:用100μA、1s的电流刺激对正常大鼠进行电刺激,每天一次,在5次以上。
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(3)电刺激后:用响度105~120dB、时间2min的铃声刺激对电刺激若干次后的正常大鼠进行铃声刺激,有运动反应。
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(4)记录电刺激后的正常大鼠在铃声刺激时的行为反应、潜伏期和持续时间。
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7.组织学检查
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