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七、病原体检验
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感染性疾病是由细菌、病毒、真菌和寄生虫等病原体感染人体引起。根据不同的临床特征，正确采集各类标本、进行病原体检查是感染性疾病诊断的关键步骤。病原体的检查包括有：①通过直接显微镜病原体形态学观察。②进行病原体分离培养与鉴定。③用免疫学方法检出病原体抗原成分和检测机体对病原体抗原成分产生的免疫产物。④借助分子生物学技术测定标本中病原体的相关基因查见。在完成病原体的检出和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征，快速作出诊断，并积极参与临床选择抗菌药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免产生耐药菌株。
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（一）标本涂片显微镜病原体检查
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取患者标本直接涂片作显微镜检查病原体是简便而快速的方法之一。有染色法和不染色法之分。染色法可清晰观察细菌染色性、形状、大小与排列，真菌细胞形状、孢子与菌丝、检查组织标本-宿主细胞内包涵体和寄生虫包囊与滋养体；不染色法可清晰观察细菌动力和寄生虫虫卵。显微镜下所见的诊断价值与所采集标本的性质（有菌或无菌）密切相关。
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1．染色法
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标本涂片染色显微镜细菌检查（microscopic examination of bacteria in stained samples）
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为细菌感染性疾病病原学诊断的常用检测项目之一。病人标本作涂片，并用革兰染色或抗酸等其他染色法染色，在显微镜下观察细菌染色性、形状、大小与排列。相关项目：细菌分离、培养和鉴定与体外药物敏感性试验。
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［参考范围］（血液、脑脊液、心包液、胸腹水）不能查见细菌；（下疳渗液；镀银染色）不能查见棕黑色螺旋体；（痰、咽拭子、尿道、阴道分泌物、皮肤创伤分泌物）可查见少量正常菌群细菌；（粪便）可查见较多杆菌与少量球菌。
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［临床意义］
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（1）脑脊液：查见：①革兰染色阴性或阳性细菌可诊断为细菌性脑脊髓膜炎。②革兰染色阴性肾形双球菌，结合病人发热、喷射状呕吐、剧烈头痛和脑膜刺激体征，可诊断为流行性脑脊髓膜炎。③抗酸染色或金胺“O”染色阳性杆菌可诊断为结核性脑膜炎。
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（2）痰液：查见：抗酸染色或金胺“O”染色阳性杆菌可疑为肺结核，需进一步检测予以确诊。
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（3）咽拭子：查见：阿尔伯特染色蓝黑色异染颗粒，并用革兰染色查见革兰阳性棒状杆菌，且呈X、V、Y等排列，即报告为“找到有异染颗粒革兰阳性杆菌”，疑为白喉棒状杆菌。
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（4）尿道、阴道分泌物：查见：①多形核粒细胞内革兰染色阴性、卵圆形或肾形成对排列双球菌，对男性病人可诊断为淋病；对女性病人可疑为淋病，需进一步检测予以确诊。②革兰染色不定小杆菌与其他革兰阴性杆菌（如拟杆菌），而缺乏乳酸杆菌形态，提示可能为细菌性阴道病。
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（5）粪便：如球菌杆菌比例增高，疑为抗生素相关性腹泻。
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（6）下疳渗液：查见：镀银染色棕黑色螺旋体，提示为梅毒螺旋体感染；但阴性不能排除梅毒诊断。
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［应用评价］标本要求：无菌采集。无菌体液标本（血液、脑脊液、心包液、胸腹水）出现阳性结果具有诊断价值；对有正常菌群寄居的腔道分泌物（痰、粪便、皮肤创伤分泌物）阳性结果不能确定诊断，需进一步作相关项目检测予以确诊。
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标本涂片染色显微镜真菌检查（microscopic examination of fungi in stained samples）
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为真菌感染性疾病病原学诊断的常用检测项目之一。病人标本作涂片、染色，在显微镜下观察真菌细胞形状、孢子与菌丝。相关项目：真菌分离、培养和鉴定、新生隐球菌荚膜抗原测定。
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［参考范围］脑脊液不能查见真菌；阴道分泌物可查见极少量酵母菌（属正常菌群）；皮屑、甲屑、病毛发、穿刺液及分泌物不能查见真菌。
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［临床意义］标本要求：无菌采集。
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（1）脑脊液：查见：墨汁染色黑色背景中的透亮菌体（时见出芽）和宽厚荚膜，可报告“找到新生隐球菌”。
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（2）阴道分泌物涂片：查见：卵圆形革兰阳性孢子或与出芽细胞相连的成链状及分支状假菌丝，疑真菌性阴道炎。
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（3）皮屑、甲屑、病毛发：查见：乳酸酚棉蓝染色标本检出蓝色菌丝和孢子，确定真菌感染。
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（4）溃疡渗出液、脓液、痂皮、组织块、脓疡或囊肿穿刺液：涂片革兰染色或PAS染色后，查见：位于巨噬细胞或中性粒细胞内阳性卵圆形或梭形孢子，疑申克孢子丝菌感染，需作进一步鉴定。
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