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(2)基因型 目前认为HEV至少有7个基因型,即缅甸株(1型),墨西哥株(2型),美国株和猪HEV(3型),新近从中国台湾和辽宁分离的中国株(4型),意大利株(5型),希腊-1株(6型),希腊-2株(7型),从中国台湾和广州分离的毒株可归为4型或8型。我国的大多数HEV分离株与缅甸株为同一基因型。
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HEV可在人胚肺二倍体细胞(2BS)和FRh K4细胞体外培养,用HEV cDNA探针斑点杂交法和免疫荧光法检测细胞培养物为HEV RNA和HEV抗原阳性;用培养细胞的提取液感染猕猴也获成功。用感染HEV的食蟹猴肝细胞体外培养,可见HEV在肝细胞内复制。但目前HEV尚不能大量体外细胞培养。
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除已知人类感染HEV外,近年来发现凡>3周龄猪100%都可检测到抗-HEV抗体、HEV RNA等血清标志物,现已明确全球猪都存在HEV感染,其意义尚不明确,提示HEV有潜在的动物源性传播,是HEV感染又一个储存宿主,可能与人类感染有关。关于HEV疫苗的研究与评价,目前正处于研究当中的疫苗有NIH杆状病毒表达的疫苗,另还有NIH日本株状病毒表达的病毒样颗粒(VLPs)口服疫苗,但疗效还不确切。
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6.庚型肝炎病毒(hepatitis G virus/GBV-C)
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1995年,Simons等发现庚型肝炎病毒(hepatitis G virus, HGV),最初曾认为该病毒是非甲—非戊型肝炎病原。但是,近年来的多数研究表明,HGV可能不致病,它不是严格意义上的肝炎病毒的一种。
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HGV/GBV-C和HCV同属黄病毒科,为单正链RNA病毒,其基因组全长9.1~9.4kb, 有一个连续的开放读码框架,编码一个长度约2870~2900个氨基酸的多聚前体蛋白。5’端和3’端均有一个较短的非编码区(UTR)。多聚前体蛋白的氨基端为结构区,羧基端为非结构区。结构区分为衣膜1(E1)和E2。与丙型肝炎病毒(HCV)不同之处是无核心区或核心区较短,仅编码79个氨基酸。非结构区分为NS2、NS3、NS4 A/B、NS5 A/B等区,分别编码蛋白酶、解旋酶和RNA依赖的RNA聚合酶(图9-6)。
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至今尚未观察到HGV的病毒颗粒。
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图9-6 HGV/GBC-C基因组结构(Simmonds, 2003)
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7.TTV(transfusion transmitted virus)
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(1)病毒学特征 TTV系无包膜的小型病毒,病毒颗粒大小约30~50nm,核壳内含有单链环状DNA, 基因组长度约3.9kb。病毒分类尚未定。
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(2)基因结构 TTV系由3852个核苷酸组成圆环状单链(负链)DNA, 为约1.2kb的非翻译区和约2.6kb的翻译区,翻译区中有长(ORF1)、短(ORF2)两种编码病毒蛋白的主要开放阅读框架(ORF),部分 ORF相互交错重叠,TA278株 ORF1和 ORF2分别编码770与202个氨基酸。ORF1位于TTV基因组的第589~2898位核苷酸,编码构成核壳的结构蛋白。ORF2位于第107~712位核苷酸,编码病毒复制中所必需的非结构蛋白。
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(3)TTV基因组的变异和基因型 TTV虽为DNA病毒,但其基因变异发生率不亚于RNA病毒。目前的TTV株至少可分类出11种基因型(基因型1~11)。在人体内存在准种现象。
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目前较多文献认为,TTV不存在肝脏致病性。也有部分文献发现TTV有一定致病性。有关TTV在人群中的感染率,各研究报告差异也较大。TTV在各国及各种人群确切感染率及致病性均应进一步研究。
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总之,TTV在普通人群及肝病患者中存在高度感染率。G1型TTV与肝脏疾病有一定相关性。不同区域引物对TTV的检测有明显不同的检测结果,应根据TTV检出型别情况探讨TTV与疾病的关系。鉴于TTV在人群中高度感染,应对其传染途径及与人类其他疾病关系进一步研究。
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8.TMLV(TTV-liked mini virus, TLMV)
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2000年Takahashi等报告,应用TTV-DNA引物作PCR, 检测日本300份因抗-HCV阳性而未被使用的供血员血浆,结果10份TTV DNA滴度>105拷贝/ml, 其中3份(分别为CBD231、279和203)血浆PCR产物的长度较预期为短(约1.2kb),称为扩增产物0。然后对此扩增产物进行测序,并设计新引物作反向PCR, 获得一个长约2.1kb DNA, 称为扩增产物1,再根据其序列设计引物作反向PCR, 获得约1.2kb DNA, 称为扩增产物2,经测序证明其与扩增产物0的序列相同。由扩增产物1和2序列推算,该病毒的全长DNA序列较TTV为短,分别为2860nt(CBD231株)、2856nt(BD279株)和2897nt(CBD203株),但较鸡贫血病毒(chicken anemia virus, CAV)长,认为是一种新病毒,称为TTV样微小病毒(TTV-like mini virus, TLMV)。
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TLMV与TTV和CAV相似,其基因组为负链DNA。其基因结构也与TTV和CAV相似,TLMV和CAV有3个开放读框(ORFs),但TTV仅有2个 ORFs, 三者均有一个较长的 ORF1和较短的 ORF2,在 ORF1前端均与 ORF2部分重叠,虽然TLMV与TTV和CAV基因组全长不等,但均有一个含T-Ag功能区和GGGCAA重复序列的相对保守区。根据保守区的基因序列作基因发生树分析表明,TLMV更接近于TTV, 但与CAV距离较远。TLMV的 ORF1编码约660个氨基酸,因该蛋白具有若干N糖基化功能区,推测为糖蛋白,这与TTV和CAV相似。关于TLMV在人群中流行率及致病性的问题仍在研究中。
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Takahashi等认为,TTV、TLMV和CAV可能组成一个病毒科(或超级科),该科具有下列特点:①基因组为单链闭合环状DNA;②在ORF2上游非编码区具有保守的TATA盒子、T-Ag和Cap位点功能区;③存在ORF2编码的蛋白功能区;④ORF1编码一个糖蛋白,其氨基末端富含精氨酸。本病毒科很可能存在更多的成员,其非编码区的保守核苷酸序列对发现新成员可能有用。
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虽然目前从人类分离的本科病毒对人几乎不致病,但在其众多成员中,某些病毒可能致病。由于本科病毒的异源性较高,因此,在研究致病性时,必须按各组单个成员或同一小组内关系最亲近的成员进行分析。但最后不同新病毒的发现命名与研究,仍需要国际病毒命名委员会和其他专业机构来确定。
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9.SEN病毒
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2000年意大利学者Primi等从1例感染HIV的毒瘾者血清中分离到一种约3800个核苷酸的单链DNA病毒,以该患者姓名的第一个字母命名为SEN病毒(SENV)。该病毒有8个成员,分别命名为SENV-A~H。SENV属于TTV相关病毒的超级家族成员,为小的、无包膜的单链环状DNA病毒。对SENV、TLMV、TA278(3.852bp)及YONBANV的ORFs全序列分析比较发现,SENV的ORF1氨基酸残基为642~762个。N末端富含精氨酸/赖氨酸区相对保守,与TTV原型株、SANBAN、YONBAV和CAV相似。SENV的ORF1具有三个Rep蛋白基序,其中SENV-A、SENV-C及SENV-H的羧基端包含一个亮氨酸拉链结构。在不同人群中SENV流行率各异,在意大利健康献血员中流行率较低,但在经血传播疾病发病率高的人群中流行率较高。但其致病性问题尚未证实。目前一般将SENV视为TTV的一个分离株。
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【思考题】
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1.对于非A-E、HGV/GBV-C、TTV、TLMV和SEN-V性病毒性肝炎,请设计研究方案,以反向遗传学手段克隆、鉴定其嗜肝性肝炎病毒病原体。
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