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(2)药品
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⑴固定液:10%福尔马林。配制方法:10mL的甲醛水溶液加入90mL的蒸馏水配制而成。
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⑵染液Ⅰ:石炭酸40g,硫酸铜5g,浓盐酸1.25~1.5mL,蒸馏水1000mL。
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⑶染液Ⅱ:1%三氯化铁500mL,加入0.2%冰醋酸。
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⑷显色液:1%亚铁氰化钾水溶液。
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⑸保存液:含有2%盐酸的10%福尔马林。
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⑹黏片液:10%~15%明胶水溶液。
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【实验内容】
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(1)剥取动物脑组织后用10%福尔马林固定。
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(2)切片:1~2mm厚。注意:⑴切片刀用热水清洗;⑵切记,不得来回拉刀,一刀切到底。
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(3)冲洗:流水冲洗1~2天,蒸馏水洗12小时(或水洗24小时,蒸馏水过夜)。
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(4)浸脑厚片:浸入染液Ⅰ5min。注意:⑴此液必须浸没脑片,高出脑片3~5cm;⑵用竹夹(或玻璃棒,禁用金属镊子)将脑切片放入温度加热至60~65℃的染液中,并不断翻动,直至切片呈青白色;⑶温度不得高于70℃,否则颜色过深;⑷按染液Ⅰ配方配制溶液一份,可染人大脑厚片6~7片。
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(5)5min后取出,即放入大量冰水中浸洗2min。
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(6)浸入染液Ⅱ1~3min,直到灰质部分明显可见时取出,时间约为2min。
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(7)流水冲洗1min,时间不可过长,超过1min后脑片上的鲜蓝色将变成灰蓝色。
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(8)浸入显色液1~3min,此时灰质呈蓝色,白质颜色不变。
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(9)流水冲洗5~10min,时间过长脑片将会褪色。
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(10)结果:白质无色,灰质深蓝,界限分明;若脑组织新鲜,灰质着色后可显示微小核团,比未灌注固定液的脑厚片显色效果更好。
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(11)保存方法:⑴存放于含有2%盐酸的10%福尔马林液中,使脑厚片保存鲜艳的深蓝色。⑵用毛笔将热的10%~15%明胶水溶液涂于脑厚片的一面,然后贴在玻片上,轻压排出气泡,待明胶冷却后,存放于10%的福尔马林液中。此法较方法⑴效果更好。
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(周茵)
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现代生理心理学实验教程 实验4 脑组织切片的制作(一)
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——脑组织的固定
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