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本实验利用乙酰胆碱酯酶能使乙酰胆碱水解，而未被水解的剩余乙酰胆碱可与碱性羟胺作用，生成乙酰羟胺，后者在酸性溶液中与铁离子作用形成棕色复合物，可用比色法加以测定，计算剩余Ach含量，从而推算出胆碱酯酶活力。其反应式如下：
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【实验对象】
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成年大鼠4只。
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【实验用品】
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条件反射箱，721分光光度计（上海第三分析仪器厂生产）。
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（1）乙酰胆碱基质缓冲液：
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A液：巴比妥钠1.03g，蒸馏水30mL，1mol/L盐酸6mL，碳酸钠0.53g，加热助溶，然后加生理盐水至50mL。
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B液：氯化乙酰胆碱910mg，或溴化乙酰胆碱1.13g，加生理盐水至10mL（注意：氯化乙酰胆碱在一般水溶液中易水解失效，因此必须在临用前配制，或以5%的NaH2PO4溶液配成0.1%左右的氯化乙酰胆碱贮存液，配好后用瓶装密封放入冰箱中贮存，药效可保持一年，临用前用生理盐水稀释至所需浓度。）
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C液：氯化镁0.42g，氯化钾20mg，生理盐水加至10mL。
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（2）碱性羟胺溶液：14%盐酸羟胺与14%氢氧化钠溶液按1∶1比例混合。
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（3）氯化铁溶液：氯化铁（FeCl3·6H2O）10g，以0.02mol/L盐酸溶解并加至1000mL。
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以上溶液事先都由教师配制好，实验前学生只需准确量取A液16mL，B液2mL，C液2mL混合即可。
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【实验内容】
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1．躲避条件反射的建立
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选成年大鼠4只，2只为对照组，2只为实验组。实验组动物需进行躲避条件反射训练，采用条件反射箱进行，该箱用塑料板隔成两小间（一间明室，一间暗室），隔板底部中间有一小门相通，暗室的底部装有电栅地板可通电。
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实验时将动物放入明室内，任其在箱内探寻，用秒表测定动物从明室通过隔板上的小门进入暗室的时间（即潜伏期），让动物在暗室内呆10s后放回鼠笼。如此反复三次，每次间隔3min，计算三次潜伏期的平均值。
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第4次实验时，记录潜伏期。当动物进入暗室后，立即关闭小门，给予电击（电压70V，电流1mA），电击时间5s。5min后进行第5次实验，方法同第4次实验，直至动物在明室内呆上4min不再进入暗室才算完成（本实验最多电击10次，计算电击后的潜伏期是否比电击前有所增加），此时将动物立即断头处死。
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对照组动物只在实验箱内呆上同样的时间，不给与电击，然后断头处死。
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2．乙酰胆碱酯酶样本的制备
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行为训练结束后，立即断头处死动物取血，放置1小时后离心（1500r/min）15min，取上层清液。
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（1）按羟胺比色法进行。混合液配制具体操作如表7-1。
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表7-1 比色法测定乙酰胆碱酯酶操作步骤
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