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（二）标本病原体分离、培养和鉴定
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细菌和真菌的分离培养、鉴定是细菌、真菌感染性疾病诊断的“金标准”，并提供纯培养物作体外药物敏感性试验，指导抗菌治疗和预测治疗效果；尽管病毒分离培养和鉴定也是病毒感染性疾病诊断依据，但基于试验设备与技术要求较高，临床上不将其列为常规检测项目。
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1．血液标本
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血液标本细菌分离、培养与鉴定（isolation，culture and identification of bacteria in blood samples）
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是确诊细菌血流感染的最可靠检验项目，分离的菌种可用于体外药物敏感性试验。相关项目：血涂片检查，体外药物敏感性试验。
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［参考范围］（血液；手工法和仪器法）未检出细菌。
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［临床意义］血培养阳性：提示病原微生物已进入血流，可造成全身播散，引起血流感染。常见病原体：金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、沙门菌属、克雷伯菌属等。近年来，感染病原菌种类不断变化，肠杆菌科、非发酵菌、凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌属引起的血流感染发病率均增加。
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［应用评价］标本要求：无菌采集；为提高血培养检出率，特别要求规范化操作（从采血时机、采血部位、采集血培养瓶数、采血量到送检时间和温度均须严格）。一旦血培养阳性，则在取样涂片、染色、镜检的同时，转种培养基进行分离培养，做直接抗菌药物敏感性试验；并鉴定细菌种属（必要时再分型）与抗菌药物体外敏感性试验。
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阳性：结果报告分为3级：①一级：一旦血培养仪报警阳性，即从阳性瓶取样进行涂片、革兰染色、镜检，并报告临床医生（血培养阳性以危急结果报告）；②二级：报告直接抗菌药物敏感性试验结果；③三级：报告细菌种属、药物敏感性试验、结果评价与临床建议。
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血培养阳性须排除污染菌：皮肤消毒、静脉穿刺过程中无菌操作是避免污染的重要环节。有时很难区分血培养阳性菌是真致病菌或是污染菌，如怀疑为污染菌，则报告为：“该菌株可能为采样时皮肤污染微生物，如需进一步检测，请与微生物科联系”。常见的污染菌：凝固酶阴性葡萄球菌、芽孢杆菌属（除外炭疽杆菌）、棒状杆菌属、丙酸杆菌属、草绿色链球菌、气球菌、微球菌等，这些细菌在一定条件下仍能引起严重感染，故如从2份或2份以上血培养中分离到同一种细菌，也应结合临床表现，作出病原菌诊断。
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阴性：如培养一定时间（如5～7日）后仍无微生物生长，仪器未予报警，则再经盲目传代后证实无细菌生长，则可见报告为“培养5～7日未见细菌生长”。
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血液标本真菌分离、培养与鉴定（isolation, culture and identification of fungi in blood samples）
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是确诊真菌血流感染的最可靠检验项目，分离的菌种可用于体外药物敏感性试验。相关项目：血涂片检查，体外药物敏感性试验，真菌1,3-β-D-葡聚糖检测。
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［参考范围］（血液；手工法和仪器法）未检出真菌。
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［临床意义］疑似阳性的血培养瓶应进行涂片革兰染色检查，发现有真菌孢子应立即报告临床，诊断为真菌血流感染。常见病原体：白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌与热带假丝酵母菌等。
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［应用评价］标本要求：无菌采集。血培养仪发出阳性报警的培养瓶中抽取培养液移种于沙氏琼脂，置35℃和29℃孵育24～48h后观察菌落形态，将分离的真菌进行特异性的代谢试验（包括糖同化和糖发酵试验）鉴定菌株；或接种酵母菌显色培养基，则可在24h得到菌株的鉴定结果，缩短报告时间。
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2．脑脊液标本
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脑脊液标本细菌分离、培养与鉴定（isolation, culture and identification of bacteria in cerebrospinal fluid samples）
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是确诊中枢神经系统细菌感染的最可靠检验项目。相关项目：脑脊液涂片染色显微镜细菌检查、体外药物敏感性试验。
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［参考范围］（脑脊液）未检出细菌。
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［临床意义］阳性：检出脑膜炎奈瑟菌为流行性脑脊髓膜炎；检出肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌与链球菌为化脓性脑膜炎感染；检出结核分枝杆菌为结核性脑膜炎；检出厌氧菌或厌氧菌与需氧菌混合感染常为脑脓肿。如脑脊液培养48h仍无细菌生长，则报告为“培养2日无细菌生长”。
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［应用评价］标本要求：无菌采集；脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对外界抗力低，易自溶，故标本应立即置于35℃保温送检。正常脑脊液是无菌的，当病原微生物侵犯中枢神经系统实质、被膜及血管等引起急性或慢性炎症性称中枢神经系统感染。对有脑膜刺激症状、疑为神经系统感染性疾病的病人应做脑脊液培养病原学诊断。
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脑脊液标本真菌分离、培养与鉴定（isolation, culture and identification of fungi in cerebrospinal fluid samples）
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是确诊中枢神经系统真菌感染的最可靠检验项目。相关项目：脑脊液涂片墨汁染色显微镜真菌检查、体外药物敏感性试验，新生隐球菌荚膜多糖抗原检测。
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［参考范围］（脑脊液）未检出真菌。
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