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(二)标本病原体分离、培养和鉴定
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细菌和真菌的分离培养、鉴定是细菌、真菌感染性疾病诊断的“金标准”,并提供纯培养物作体外药物敏感性试验,指导抗菌治疗和预测治疗效果;尽管病毒分离培养和鉴定也是病毒感染性疾病诊断依据,但基于试验设备与技术要求较高,临床上不将其列为常规检测项目。
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1.血液标本
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血液标本细菌分离、培养与鉴定(isolation,culture and identification of bacteria in blood samples)
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是确诊细菌血流感染的最可靠检验项目,分离的菌种可用于体外药物敏感性试验。相关项目:血涂片检查,体外药物敏感性试验。
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[参考范围](血液;手工法和仪器法)未检出细菌。
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[临床意义]血培养阳性:提示病原微生物已进入血流,可造成全身播散,引起血流感染。常见病原体:金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、沙门菌属、克雷伯菌属等。近年来,感染病原菌种类不断变化,肠杆菌科、非发酵菌、凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌属引起的血流感染发病率均增加。
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[应用评价]标本要求:无菌采集;为提高血培养检出率,特别要求规范化操作(从采血时机、采血部位、采集血培养瓶数、采血量到送检时间和温度均须严格)。一旦血培养阳性,则在取样涂片、染色、镜检的同时,转种培养基进行分离培养,做直接抗菌药物敏感性试验;并鉴定细菌种属(必要时再分型)与抗菌药物体外敏感性试验。
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阳性:结果报告分为3级:①一级:一旦血培养仪报警阳性,即从阳性瓶取样进行涂片、革兰染色、镜检,并报告临床医生(血培养阳性以危急结果报告);②二级:报告直接抗菌药物敏感性试验结果;③三级:报告细菌种属、药物敏感性试验、结果评价与临床建议。
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血培养阳性须排除污染菌:皮肤消毒、静脉穿刺过程中无菌操作是避免污染的重要环节。有时很难区分血培养阳性菌是真致病菌或是污染菌,如怀疑为污染菌,则报告为:“该菌株可能为采样时皮肤污染微生物,如需进一步检测,请与微生物科联系”。常见的污染菌:凝固酶阴性葡萄球菌、芽孢杆菌属(除外炭疽杆菌)、棒状杆菌属、丙酸杆菌属、草绿色链球菌、气球菌、微球菌等,这些细菌在一定条件下仍能引起严重感染,故如从2份或2份以上血培养中分离到同一种细菌,也应结合临床表现,作出病原菌诊断。
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阴性:如培养一定时间(如5~7日)后仍无微生物生长,仪器未予报警,则再经盲目传代后证实无细菌生长,则可见报告为“培养5~7日未见细菌生长”。
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血液标本真菌分离、培养与鉴定(isolation, culture and identification of fungi in blood samples)
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是确诊真菌血流感染的最可靠检验项目,分离的菌种可用于体外药物敏感性试验。相关项目:血涂片检查,体外药物敏感性试验,真菌1,3-β-D-葡聚糖检测。
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[参考范围](血液;手工法和仪器法)未检出真菌。
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[临床意义]疑似阳性的血培养瓶应进行涂片革兰染色检查,发现有真菌孢子应立即报告临床,诊断为真菌血流感染。常见病原体:白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌与热带假丝酵母菌等。
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[应用评价]标本要求:无菌采集。血培养仪发出阳性报警的培养瓶中抽取培养液移种于沙氏琼脂,置35℃和29℃孵育24~48h后观察菌落形态,将分离的真菌进行特异性的代谢试验(包括糖同化和糖发酵试验)鉴定菌株;或接种酵母菌显色培养基,则可在24h得到菌株的鉴定结果,缩短报告时间。
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2.脑脊液标本
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脑脊液标本细菌分离、培养与鉴定(isolation, culture and identification of bacteria in cerebrospinal fluid samples)
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是确诊中枢神经系统细菌感染的最可靠检验项目。相关项目:脑脊液涂片染色显微镜细菌检查、体外药物敏感性试验。
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[参考范围](脑脊液)未检出细菌。
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[临床意义]阳性:检出脑膜炎奈瑟菌为流行性脑脊髓膜炎;检出肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌与链球菌为化脓性脑膜炎感染;检出结核分枝杆菌为结核性脑膜炎;检出厌氧菌或厌氧菌与需氧菌混合感染常为脑脓肿。如脑脊液培养48h仍无细菌生长,则报告为“培养2日无细菌生长”。
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[应用评价]标本要求:无菌采集;脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对外界抗力低,易自溶,故标本应立即置于35℃保温送检。正常脑脊液是无菌的,当病原微生物侵犯中枢神经系统实质、被膜及血管等引起急性或慢性炎症性称中枢神经系统感染。对有脑膜刺激症状、疑为神经系统感染性疾病的病人应做脑脊液培养病原学诊断。
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脑脊液标本真菌分离、培养与鉴定(isolation, culture and identification of fungi in cerebrospinal fluid samples)
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是确诊中枢神经系统真菌感染的最可靠检验项目。相关项目:脑脊液涂片墨汁染色显微镜真菌检查、体外药物敏感性试验,新生隐球菌荚膜多糖抗原检测。
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[参考范围](脑脊液)未检出真菌。
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