打字猴:1.701464555e+09
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1701464556 选成年大鼠4只,2只为对照组,2只为实验组。实验组动物需进行躲避条件反射训练,采用条件反射箱进行,该箱用塑料板隔成两小间(一间明室,一间暗室),隔板底部中间有一小门相通,暗室的底部装有电栅地板可通电。
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1701464558 实验时将动物放入明室内,任其在箱内探寻,用秒表测定动物从明室通过隔板上的小门进入暗室的时间(即潜伏期),让动物在暗室内呆10s后放回鼠笼。如此反复三次,每次间隔3min,计算三次潜伏期的平均值。
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1701464560 第4次实验时,记录潜伏期。当动物进入暗室后,立即关闭小门,给予电击(电压70V,电流1mA),电击时间5s。5min后进行第5次实验,方法同第4次实验,直至动物在明室内呆上4min不再进入暗室才算完成(本实验最多电击10次,计算电击后的潜伏期是否比电击前有所增加),此时将动物立即断头处死。
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1701464562 对照组动物只在实验箱内呆上同样的时间,不给与电击,然后断头处死。
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1701464564 2.乙酰胆碱酯酶样本的制备
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1701464566 行为训练结束后,立即断头处死动物取血,放置1小时后离心(1500r/min)15min,取上层清液。
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1701464568 (1)按羟胺比色法进行。混合液配制具体操作如表7-1。
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1701464570 表7-1 比色法测定乙酰胆碱酯酶操作步骤
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1701464575 (2)混合液配制好后,用540nm和绿色滤光板,以空白管液调至零点,光电比色,读取光密度,查标准曲线得酶活力单位。
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1701464577 表7-2 比色法测定乙酰胆碱酯酶的标准曲线
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1701464582 【说明及建议】
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1701464584 (1)单位定义:每毫升血清在37℃温箱内保温1小时,每水解1μmol的乙酰胆碱为1个酶活性单位。
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1701464586 (2)溶血血清不能用来测定,因红细胞中含有很高的酶活力,而导致结果增高。
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1701464588 (3)加入三氯化铁溶液后,如有明显混浊,应离心后取上清液比色。
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1701464590 (4)本法显色后很稳定,历时4小时也不致影响结果。
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1701464592 (5)血清分离后,置于4℃冰箱内,至少1周内酶活力无明显下降。
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1701464594 (6)碱性盐酸羟胺溶液加入后,至少应等待1min,以保证其与Ach的作用。
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1701464596 (7)B液(氯化乙酰胆碱)必须是当天用当天配,因为乙酰胆碱在水溶液中容易水解失效,或者用5%NaH2PO4缓冲液配成0.1%氯化乙酰胆碱贮存液,临用前用生理盐水稀释至所需浓度。
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1701464598 (肖健)
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