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选成年大鼠4只，2只为对照组，2只为实验组。实验组动物需进行躲避条件反射训练，采用条件反射箱进行，该箱用塑料板隔成两小间（一间明室，一间暗室），隔板底部中间有一小门相通，暗室的底部装有电栅地板可通电。
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实验时将动物放入明室内，任其在箱内探寻，用秒表测定动物从明室通过隔板上的小门进入暗室的时间（即潜伏期），让动物在暗室内呆10s后放回鼠笼。如此反复三次，每次间隔3min，计算三次潜伏期的平均值。
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第4次实验时，记录潜伏期。当动物进入暗室后，立即关闭小门，给予电击（电压70V，电流1mA），电击时间5s。5min后进行第5次实验，方法同第4次实验，直至动物在明室内呆上4min不再进入暗室才算完成（本实验最多电击10次，计算电击后的潜伏期是否比电击前有所增加），此时将动物立即断头处死。
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对照组动物只在实验箱内呆上同样的时间，不给与电击，然后断头处死。
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2．乙酰胆碱酯酶样本的制备
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行为训练结束后，立即断头处死动物取血，放置1小时后离心（1500r/min）15min，取上层清液。
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（1）按羟胺比色法进行。混合液配制具体操作如表7-1。
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表7-1 比色法测定乙酰胆碱酯酶操作步骤
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（2）混合液配制好后，用540nm和绿色滤光板，以空白管液调至零点，光电比色，读取光密度，查标准曲线得酶活力单位。
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表7-2 比色法测定乙酰胆碱酯酶的标准曲线
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【说明及建议】
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（1）单位定义：每毫升血清在37℃温箱内保温1小时，每水解1μmol的乙酰胆碱为1个酶活性单位。
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（2）溶血血清不能用来测定，因红细胞中含有很高的酶活力，而导致结果增高。
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（3）加入三氯化铁溶液后，如有明显混浊，应离心后取上清液比色。
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（4）本法显色后很稳定，历时4小时也不致影响结果。
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（5）血清分离后，置于4℃冰箱内，至少1周内酶活力无明显下降。
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（6）碱性盐酸羟胺溶液加入后，至少应等待1min，以保证其与Ach的作用。
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（7）B液（氯化乙酰胆碱）必须是当天用当天配，因为乙酰胆碱在水溶液中容易水解失效，或者用5%NaH2PO4缓冲液配成0.1%氯化乙酰胆碱贮存液，临用前用生理盐水稀释至所需浓度。
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（肖健）
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